2012 - 11. 探讨重组人促红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子联合应用对缺氧心肌细胞保护的分子机制
探讨重组人促红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子联合应用对缺氧心肌细胞保护的分子机制->(PDF)
付振虹，董 蔚，盖鲁粤，薛 浩，陈韵岱
［摘要］：
目的 通过研究促红细胞生成素（ＥＰＯ）联合应用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）对缺氧心肌细胞的影响，探讨其对缺氧心肌细胞发挥保护作用可能的分子机制。
方法 采用９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２气体充分置换的１％胎牛血清ＤＭＥＭ培养液培养２４ｈ，建立缺氧心肌细胞模型。将心肌细胞分为５组，对照组、缺氧组、缺氧＋ＥＰＯ组、缺氧＋Ｇ－ＣＳＦ组和缺氧＋ＥＰＯ＋Ｇ－ＣＳＦ联合给药组。建立缺氧模型２４ｈ后收集５组心肌细胞标本。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法检测各组心肌细胞中的Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ的表达，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法检测各组心肌细胞中的Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、细胞色素ｃ（ＣｙｔＣ）、磷酸化信号转导与转录活化因子３（ｐ－ＳＴＡＴ－３）、Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。
结果 成功建立了心肌细胞缺氧模型。与缺氧组相比：ＥＰＯ、Ｇ－ＣＳＦ和联合给药组明显提高缺氧心肌细胞的存活率，减少凋亡率和总死亡率（Ｐ＜０．０１）。与缺氧组相比：ＥＰＯ组和Ｇ－ＣＳＦ组Ｂｃｌ－２表达增加（Ｐ＜０．０１），Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ－３表达减少（Ｐ＜０．０１），联合治疗组作用最明显，强于单独药物治疗组（Ｐ＜０．０１），ＥＰＯ和Ｇ－ＣＳＦ组之间无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ＣｙｔＣ表达在ＥＰＯ组、Ｇ－ＣＳＦ组和联合给药组明显降低（Ｐ
＜０．０１）；三组之间无明显差异（Ｐ＞０．０５）；Ｐ－ＳＴＡＴ－３蛋白表达在联合给药组明显增高（Ｐ＜０．０１）。
结论 ＥＰＯ联合Ｇ－ＣＳＦ治疗，可能通过激活线粒体途径和Ｊａｎｕｓ激酶／信号转导和转录激活子（ＪＡＫ／ＳＴＡＴ）途径联合发挥更强的抗凋亡作用。
